一种液态复合生物多控杀菌剂及其制备方法与应用

日期:2019-08-04 05:29:06

一种液态复合生物多控杀菌剂及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明涉及一种液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:地衣芽孢杆菌的菌液5~20份,枯草芽孢杆菌的菌液5~20份,蜡样芽孢杆菌的菌液5~20份,淡紫拟青霉菌的菌液5~20份,绿色木霉菌的菌液5~20份,哈茨木霉菌的菌液5~20份,禾粟链霉菌的菌液5~20份,灰产色链霉菌的菌液5~20份,吸水链霉菌的菌液5~20份,烟叶提取物5~25份,苦参提取物5~25份,蛇床子提取物5~25份,食用菌棒提取物5~25份。本发明的液态复合生物多控杀菌剂是一种高效、低毒、低残留、对人和牲畜安全的生物多控杀菌剂,尤其对水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜杀菌效果显著。
【专利说明】一种液态复合生物多控杀菌剂及其制备方法与应用
[0001]
技术领域
[0002]本发明涉及生物农药技术领域,特别是一种用于水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜的生物多控杀菌剂及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0003]随着现代生物技术和基因工程的发展以及它们在农药中的应用,生物农药的兴起已成为历史发展的趋势,而利用高效、低毒、无残留的生物农药进行生物防治已成为现代农业研究中最为活跃的领域之一。近十多年来,由于各国的重视,生物农药研究和生产都有了很大的发展,目前化学农药每年以2%的速度递减,而生物农药却以5%的速度递增。随着人们对食品安全意识和环境保护意识的进一步提尚,尚毒、尚残留杀菌剂的品种和范围将会进一步受到限制,而高效、低毒、对环境友好且不易产生抗性的复合生物多控杀菌剂将会得到愈来愈广泛的应用。在自然界,存在着许多对病害具有抑制或杀灭作用的药用植物和微生物,利用这些药用植物和微生物来防治作物病害是一种有效的生物防治方法。从这些有益微生物中筛选出施用方便、药效稳定、对人畜和环境安全的菌种,进行工业规模化的生产开发,从而制成微生物杀菌剂;从药用植物中提取、分离新的天然活性化合物是开发新生物农药的重要途径。复合生物多控杀菌剂是生物科学与工程技术结合发展的产物,随着现代生物工程技术的迅速发展,复合生物多控杀菌剂将有很大的开发前景。
[0004]目前,公开号为CN200710021724的发明专利,提供了一种丁香酚、蛇床子素复配生物杀菌剂,该复配杀菌剂由蛇床子素和丁香酚组成,丁香酚和蛇床子素的重量比例为1:1?8:1之间,复配物对人和环境安全。公开号为0吧00510017437的生物杀菌剂发明专利,具有高效、低毒、无公害、无污染、无毒副作用,抗菌谱广,药效长的优点,对细菌引发的多种病害具有预防和治疗双重作用,可广泛用于大田农作物、果林蔬菜的病害防治。公开号为CN200510117421的一种生物杀菌剂及其制备方法,其组分及含量为:玫瑰黄链霉菌(stretomyces.roseo flaves)的诱变菌株0116菌株发酵液93?96% ;苯乙基酸聚氧乙稀醚3?5%;醋酸钠(CH3⑶0Na)0.3?I %。工艺流程包括:新菌种的斜面菌活化培养一摇床培养一种子罐培养一发酵罐培养一发酵液沉淀去除残渣一添加稳定剂一成品包装。米用这种技术的配方及工艺生产的生物杀菌剂可以像一般农药一样方便使用。见效速度快,由于有效成份富含生化产物,可以直接作用于防治对象,所以一般情况下其作用效果快于活菌,使用时受环境影响较小,防治效果也就比普通生物农药稳定。公开号为CN200410034028的一种防治果蔬采后病害的生物杀菌剂及其专用菌株,它的活性成分是膜醭毕赤酵母(Pichiamenbranefaciens),能安全地用于果蔬采后病害的生物防治。公开号为CN200510136781的一种微生物杀菌剂及其制备方法,是一种用于防治植物叶部病害的生物农药及其制备方法,其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌T r O I。申请号为CN201410065238.2的一种生物杀菌剂及其制备方法,该生物杀菌剂为N-邻氯苯乙酰-N-吩嗪-1-甲酰肼,由绿针假单胞菌属菌株的遗传改良菌株SN36在液体培养基中进行二级发酵培养制得,这种生物发酵产物对多种农作物真菌病害的防治具有显著的防治效果。申请号为CN200910228004.4的一种芥末精油生物杀菌剂,其组分重量份数配比:芥末精油2?20份;包埋剂10?30份;载体5?30份;粘结剂5?20份;分散剂5?15份;填充剂I?20份。应用于多种果蔬贮藏保鲜,在包装环境内形成保护气体层,有效抑制或杀死采后主要病原菌,提高果蔬抗病性,减少贮藏过程中常见病原菌引起的腐烂,延长果蔬贮藏保鲜时间。公开号为CN02135876的一种以蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)98_I菌株制备微生物杀菌剂的生产方法,该菌株广谱性好,抑菌活性高,且对多种植物有促生和促进种子发芽的作用,对植物有诱导抗性作用。不仅可防蔬菜、瓜类土传病害,而且对花卉、草坪的土传病害也有防治效果。公开号为CN200610066718的一种中草药杀菌剂,含有如下重量份的原料制成的药剂:苍耳子50?70克,黄柏20?40克,蛇床子20?40克,苦参20?40克,白矾50?70克,露蜂房10?20克,金银花10?20克,银杏叶10?20克,白头翁15?25克,细辛10?20克。该杀菌剂由于其具有广谱抑菌活性,再加上其各个组分均为常用中药,所以对人和植物高度安全,经过进一步应用试验和配方调整,应用范围将进一步扩大到更多作物的更多病害,在A A级绿色食品生产中发挥更大作用。公开号为CN200810215887的一种植物源天然杀菌剂,其特征在于由广藿香精油和数种植物精油组合物在内的功效成分与溶剂混合配比而成,所述的功效成分由广藿香精油以0.5?30.0%的比例与肉桂精油、紫苏精油、桉叶精油、山苍子精油和香茅精油混合而成;用于因植物病原菌造成的农作物病害的防治。与以往的杀菌剂相比,其具有很好的广谱杀菌性,对非靶标生物安全,可生物降解的绿色、环保优点。公开号为CN201310477047的一种协同增效复配生物杀菌剂及其应用,它是由丁子香酚和小檗碱组成的协同增效复配植物源杀菌剂,该复配杀菌剂安全、高效、低毒、低残留、经济,防治葡萄霜霉病菌具有较高活性。它是植物源化合物丁子香酚与化学药剂小檗碱有效成分以1: 50?50:1进行二元复配的复配剂,其1:5?10:1复配剂增效明显,抑制葡萄霜霉病菌活性高。它在应用防治葡萄霜霉病方面表现突出,显示出增效杀菌作用,并且相对用量少,对作物的安全性好。该复配制剂,具有广阔的应用前景和开发价值。
[0005]尽管如此,研制一种新型的高效、低毒、对环境友好且不易产生抗性的复合生物多控杀菌剂具有重大意义。

【发明内容】

[0006]本发明的目的是提供一种液态复合生物多控杀菌剂。
[0007]本发明的另一个目的是提供一种液态复合生物多控杀菌剂的用途。
[0008]本发明的再一个目的是提供一种液态复合生物多控杀菌剂的制备方法。
[0009]本发明使用的微生物菌是中国普通微生物菌种保藏管理中心1997、2003和2012年版的菌种目录中公开的菌种,编号和菌株名是:
菌种编号为CGMCCl.1216的地衣芽抱杆菌(Bacillus cereus Frankland),菌种编号为CGMCC的1.895的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),菌种编号为CGMCCl.936的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn),菌种编号为CGMCC3.4035的淡紫拟青霉菌(PaecilomycesIilacinus Samson),菌种编号为CGMCC3.2942的绿色木霉菌(Trichoderma viridePersoon ex Fries),菌种编号为CGMCC 3.6635的哈茨木霉菌(Trichoderma harzianumRifai),菌种编号为CGMCC4.1114的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus Waksmanet Henrici ),菌种编号为CGMCC4.1111 的禾粟链霉菌(Streptomyces graminearusPreobrazhenskaya),菌种编号为 CGMCC 的 4.0892 灰产色链霉菌(Streptomycesgriseochromogenes Fukunaga)。
[0010]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物5?25份、苦参提取物5?25份、蛇床子提取物5?25份、食用菌棒提取物5?25份、吸水链霉菌的菌液5?20份、灰产色链霉菌的菌液5?20份、禾粟链霉菌的菌液5?20份、哈茨木霉菌的菌液5?20份、绿色木霉菌的菌液5?20份、淡紫拟青霉菌的菌液5?20份、蜡样芽孢杆菌的菌液5?20份、枯草芽孢杆菌的菌液5?20份、地衣芽孢杆菌的菌液5?20份。
[0011 ]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7?20份、苦参提取物7?20份、蛇床子提取物7?20份、食用菌棒提取物7?20份、吸水链霉菌的菌液5?15份、灰产色链霉菌的菌液5?15份、禾粟链霉菌的菌液5?15份、哈茨木霉菌的菌液5?15份、绿色木霉菌的菌液5?15份、淡紫拟青霉菌的菌液5?15份、蜡样芽孢杆菌的菌液5?15份、枯草芽孢杆菌的菌液5?15份、地衣芽孢杆菌的菌液5?15份。
[0012]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物10份、苦参提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水链霉菌的菌液5份、灰产色链霉菌的菌液5份、禾粟链霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、绿色木霉菌的菌液5份、淡紫拟青霉菌的菌液5份、蜡样芽孢杆菌的菌液10份、枯草芽孢杆菌的菌液1份、地衣芽孢杆菌的菌液1份。
[0013]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物20份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液6份、枯草芽孢杆菌的菌液6份、地衣芽孢杆菌的菌液6份。
[0014]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液5份、枯草芽孢杆菌的菌液5份、地衣芽孢杆菌的菌液5份。
[0015]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0016]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液15份、灰产色链霉菌的菌液15份、禾粟链霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0017]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液1份、禾粟链霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、绿色木霉菌的菌液15份、淡紫拟青霉菌的菌液15份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0018]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂的制备方法,其特征在于如下步骤:
A、烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制备方法:
a、苦参提取物的制备方法:
称取苦参25公斤,加按照重量百分比60%的乙醇,600C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次加按照重量百分比60%的乙醇量分别为300公斤、250公斤及200公斤,合并上述三次提取的滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得苦参提取物;
b、烟叶提取物的制备方法:
称取烟叶25公斤,加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液200公斤,60 °C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液均为200公斤,合并上述三次滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得烟叶提取物;
c、蛇床子提取物的制备方法:
称取蛇床子粉25公斤,置于提取罐中加水,蛇床子与水重量比为1:30,水浴100 °C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得蛇床子提取物,置于4°C冷库中保存;
d、食用菌棒提取物的制备方法:
称取食用菌棒25公斤,置于提取罐中加水,食用菌棒与水重量比为1:15,水浴100°C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得食用菌棒提取物,置于4°C冷库中保存;
B、各种菌液的制备:
制备所述吸水链霉菌的菌液、灰产色链霉菌的菌液、禾粟链霉菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,27?28°C条件下在摇床上振荡培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,27?28°C条件下培养4?5天,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;b、二级摇瓶菌种培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一级斜面菌种,于27?28 °C下培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
c、微生物菌液的发酵生产:取高氏一号合成液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于pH7.2?7.4、温度27?28°C,发酵4?5天,即得,作为生产菌液备用;
制备所述哈茨木霉菌的菌液、绿色木霉菌的菌液、淡紫拟青霉菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取I3DA液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,25?28°C条件下在摇床上振荡培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,25?28 °C条件下培养3?5天,转速为60?120转/分,待长出粗壮菌丝后,挑取粗壮菌丝在同样的固体平板培养基上划线,挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;
b、二级摇瓶菌种培养:取PDA液体培养基,接入一级斜面菌种,于25?28°C下培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
c、微生物菌液的发酵生产:取PDA液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于pH7.0?
7.2、温度25?28°C发酵3?5天,即得,作为生产菌液备用;
制备所述蜡样芽孢杆菌的菌液、枯草芽孢杆菌的菌液、地衣芽孢杆菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,30?40°C条件下在摇床上振荡培养20?48小时,转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,30?40°C条件下培养I?2天,转速为60?120转/分,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;
b、二级摇瓶菌种培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一级斜面菌种,于30?40°C下培养20?48小时,转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
C、微生物菌液的发酵生产:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于?!17.2?8.5、温度30?40°C,发酵I?2天,即得,作为生产菌液备用;
C、液态复合生物多控杀菌剂的制备:
按照如上所述原料组分的重量份配比,将上述B步骤制备的各种菌液混合,制成复合菌剂,经检验,使含总有效活菌数达2亿个/毫升,每一种有效菌的数量不得少于2000万个/毫升以上,符合国家标准GB-20287-2006,再按照如上所述原料组分的重量份配比,将上述步骤A制备的烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物与如上所述的复合菌剂混合均匀,即得。
[0019]按照本发明所述的液态复合生物多控杀菌剂的用途,其特征在于,它作为复合生物多控杀菌剂应用于水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜病害的防治。
[0020]本发明使用的原料组分具有杀菌作用如下:
枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草素、短杆菌肽等活性物质,对致病菌有明显的抑制作用。
[0021]地衣芽孢杆菌可促使机体产生抗菌活性物质,杀灭致病菌,并具有独特的生物夺氧作用机制,能抑制致病菌的生长繁殖。
[0022]蜡样芽孢杆菌可提高作物对病菌和逆境危害引发体内产生氧的清除能力,调节细胞微生物环境,维持细胞正常的生理代谢和生化反应,提高作物的抗逆性,增加作物的保健作用,能促进作物生长,提高产量。
[0023]吸水链霉菌产生抑制革兰氏阳性细菌、分枝杆菌、原虫的潮霉素(hygromycin),抑制分枝杆菌、病毒、肿瘤、丝状真菌、酵母的吸水菌素(hygroscopin),抑制革兰氏阳性细菌、丝状真菌、酵母的吸水制菌素(hygrostatin)等多种抗生素。
[0024]灰产色链霉菌的菌液,抑制环状芽孢杆菌、大肠杆菌、啤酒酵母和稻瘟菌,产生灭瘟菌或杀稻瘟素。
[0025]禾粟链霉菌产生的碱性水溶性抗生素--禾粟霉素(Graminmycin),对格兰氏阳性菌和格兰氏阴性菌有较强的抑制作用,对真菌的抑制作用也很强。大田实验结果表明,禾粟链霉素对麦类作物赤霉病的防治效果显著。
[0026]哈茨木霉菌产生的次生代谢产物对多种农业致病菌有很好的抑菌效果。
[0027]绿色木霉菌是所产纤维素酶活性最高的菌株之一,纤维素酶对作物有降解非常好的作用;绿色木霉菌又是一种资源丰富的拮抗微生物,在植物病理生物防治中具有重要的作用,具有保护和治疗双重功效,可有效防治土传性病害。
[0028]淡紫拟青霉菌属于内寄生性真菌,是一些植物寄生线虫的重要天敌,能够寄生于卵,也能侵染幼虫和雌虫,可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害;对多种农业致病菌也有很好的抑菌效果。
[0029]苦参提取物是由苦参SophorafIavescens豆科苦参属的植物的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的生物碱,主要为苦参总碱,是一种低毒、低残留、环保型农药,具有杀虫活性、杀菌活性、调节植物生长等多种功能。
[°03°]烟叶是前科烟草属植物烟草Nicotiana tabacum L.的全草。秋季采收,阴干。烟叶提取物中含有丰富的茄尼醇、绿原酸、芸香苷、生物碱等具有抑菌作用的活性物质,对金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌有很好抑菌作用;对苹果炭疽病、苹果腐烂病、番茄枯萎病、棉花枯萎病、黄瓜枯萎病、水稻纹枯病等有很好的抑制作用。
[0031]蛇床子Cnidium monnieri(L.)Cuss.,别名野胡萝卜子,为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实。夏、秋二季果实成熟时采收,除去杂质,晒干。蛇床子提取物具有很好的活性,主要含蛇床子素,可防治各种蔬菜白粉病、霜霉病等病害。
[0032]食用菌棒是由白灵菇、金针菇、杏鲍菇、香菇、木耳等食用菌类生产时制备的,食用菌棒提取物,可有效渗透植物细胞内部,抑制病毒复制扩散,钝化病毒,进而彻底杀灭病毒,同时可以平衡作物营养,促进植物细胞分裂与成长,使植物恢复正常生长。对番茄黄花曲叶病毒病,辣椒病毒病,烟草病毒病有良好治疗效果。
[0033]本发明的液态复合生物多控杀菌剂是将各种菌液按所述原料比例混配制备的复合菌剂,能很好地保持其中的各菌群数量比例相对稳定。复合菌剂与依靠自然环境进行分解的微生物菌群及与未经单独培养而混配的菌群相比,采用单独培养后,再混配在一起的菌群,由于可以根据实际需要选择合理的配比,更能充分地发挥复合菌剂中各菌群自身的生物特性与相互协同作用,所以,用其进行生物处理的适用范围非常广泛。
[0034]本发明的液态复合生物多控杀菌剂是一种高效、低毒、低残留、对人和牲畜安全的生物多控杀菌剂,尤其对水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜杀菌效果显著。
【具体实施方式】
[0035]以下各实施例仅用于对本发明进行解释说明,并不构成对权利要求范围的限定,本领域技术人员根据说明书内容可以想到的其它替代手段,均应在本发明权利要求的保护范围之内。
[0036]本发明实施例采用的微生物菌种,选择中国普通微生物菌种保藏管理中心1997、2003、2012年版的菌种目录中公开的菌种,编号和菌株名是:
菌种编号为CGMCCl.1216的地衣芽抱杆菌(Bacillus cereus Frankland),菌种编号为CGMCC的1.895的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),菌种编号为CGMCCl.936的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn),菌种编号为CGMCC3.4035的淡紫拟青霉菌(PaecilomycesIilacinus Samson),菌种编号为CGMCC3.2942的绿色木霉菌(Trichoderma viridePersoon ex Fries),菌种编号为CGMCC 3.6635的哈茨木霉菌(Trichoderma harzianumRifai),菌种编号为CGMCC4.1114的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus Waksmanet Henrici ),菌种编号为CGMCC4.1111 的禾粟链霉菌(Streptomyces graminearusPreobrazhenskaya),菌种编号为 CGMCC 的 4.0892 灰产色链霉菌(Streptomycesgriseochromogenes Fukunaga)。
[0037]实施例的制备方法为如下步骤:
A、烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制备方法:
a、苦参提取物的制备方法:
称取苦参25公斤,加按照重量百分比60%的乙醇,600C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次加按照重量百分比60%的乙醇量分别为300公斤、250公斤及200公斤,合并上述三次提取的滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得苦参提取物;
b、烟叶提取物的制备方法:
称取烟叶25公斤,加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液200公斤,60 °C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液均为200公斤,合并上述三次滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得烟叶提取物;
c、蛇床子提取物的制备方法:
称取蛇床子粉25公斤,置于提取罐中加水,蛇床子与水重量比为1:30,水浴100 °C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得蛇床子提取物,置于4°C冷库中保存;
d、食用菌棒提取物的制备方法: 称取食用菌棒25公斤,置于提取罐中加水,食用菌棒与水重量比为1:15,水浴100°C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得食用菌棒提取物,置于4°C冷库中保存;
B、各种菌液的制备:
制备所述吸水链霉菌的菌液、灰产色链霉菌的菌液、禾粟链霉菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,27?28°C条件下在摇床上振荡培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,27?28°C条件下培养4?5天,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;b、二级摇瓶菌种培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一级斜面菌种,于27?28 °C下培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
c、微生物菌液的发酵生产:取高氏一号合成液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于pH7.2?7.4、温度27?28°C,发酵4?5天,即得,作为生产菌液备用;
制备所述哈茨木霉菌的菌液、绿色木霉菌的菌液、淡紫拟青霉菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取I3DA液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,25?28°C条件下在摇床上振荡培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,25?28 °C条件下培养3?5天,转速为60?120转/分,待长出粗壮菌丝后,挑取粗壮菌丝在同样的固体平板培养基上划线,挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;
b、二级摇瓶菌种培养:取PDA液体培养基,接入一级斜面菌种,于25?28°C下培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
c、微生物菌液的发酵生产:取PDA液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于pH7.0?
7.2、温度25?28°C发酵3?5天,即得,作为生产菌液备用;
制备所述蜡样芽孢杆菌的菌液、枯草芽孢杆菌的菌液、地衣芽孢杆菌的菌液发酵方法:
a、斜面菌种活化培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,30?40°C条件下在摇床上振荡培养20?48小时,转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,30?40°C条件下培养I?2天,转速为60?120转/分,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;
b、二级摇瓶菌种培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一级斜面菌种,于30?40°C下培养20?48小时,转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养;
C、微生物菌液的发酵生产:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于?!17.2?8.5、温度30?40°C,发酵I?2天,即得,作为生产菌液备用; C、液态复合生物多控杀菌剂的制备:
按照实施例所述原料组分的重量份配比,将上述B步骤制备的各种菌液混合,制成复合菌剂,经检验,使含总有效活菌数达2亿个/毫升,每一种有效菌的数量不得少于2000万个/毫升以上,符合国家标准GB-20287-2006,再按照实施例所述原料组分的重量份配比,将上述步骤A制备的烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物与如上所述的复合菌剂混合均匀,即得。
[0038]实施例1:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物10份、苦参提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水链霉菌的菌液5份、灰产色链霉菌的菌液5份、禾粟链霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、绿色木霉菌的菌液5份、淡紫拟青霉菌的菌液5份、蜡样芽孢杆菌的菌液10份、枯草芽孢杆菌的菌液1份、地衣芽孢杆菌的菌液1份。
[0039]实施例2:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物20份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液6份、枯草芽孢杆菌的菌液6份、地衣芽孢杆菌的菌液6份。
[0040]实施例3:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液5份、枯草芽孢杆菌的菌液5份、地衣芽孢杆菌的菌液5份。
[0041 ]实施例4:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0042]实施例5:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液15份、灰产色链霉菌的菌液15份、禾粟链霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0043]实施例6:由如下重量份配比的原料组成:
烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液1份、禾粟链霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、绿色木霉菌的菌液15份、淡紫拟青霉菌的菌液15份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。
[0044]本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂使用方法及对比试验结果:
采用本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂用于水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜的使用方法是:水稻、玉米、小麦每标准亩(667平方米)每次用本品500毫升,加水15公斤稀释,蔬菜和果树每亩(667平方米)每次用本品1000毫升,加水15公斤稀释,稀释后喷洒植物茎杆和叶面。
[0045]经田间试验结果如下:
采用本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂500毫升,30重量倍浓度下加水稀释,均勾喷洒在本田的水稻秧苗的叶片、莖杆上,可有效预防水稻稻痕病、纹枯病和稻曲病的发生,防治效果可达95%;
采用本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂500毫升,30重量倍浓度下加水稀释,均匀喷洒在本田小麦、玉米秧苗的叶片、茎杆上,可有效预防小麦赤霉病、白粉病;玉米小斑病、玉米大斑病的发生,防治效果可达100%;
采用本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂1000毫升,30重量倍浓度下加水稀释,均匀喷洒在保护地草莓秧苗的叶片、蔓上,可有效预防草莓白粉病、灰霉病的发生,防治效果可达90%;喷洒在辣椒、茄子及番茄的叶片、茎杆上,可有效防治辣椒疫病、茄子黄萎病和番茄灰霉病,防治效果可达85%。
[0046]采用本发明实施例的液态复合生物多控杀菌剂7500毫升,15重量倍浓度下加水稀释,均匀喷洒在南果梨的叶片、树干上,可有效预防南果梨黑星病、黑斑病的发生,防治效果可达90%。
【主权项】
1.一种液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物5?25份、苦参提取物5?25份、蛇床子提取物5?25份、食用菌棒提取物5?25份、吸水链霉菌的菌液5?20份、灰产色链霉菌的菌液5?20份、禾粟链霉菌的菌液5?20份、哈茨木霉菌的菌液5?20份、绿色木霉菌的菌液5?20份、淡紫拟青霉菌的菌液5?20份、蜡样芽孢杆菌的菌液5?20份、枯草芽孢杆菌的菌液5?20份、地衣芽孢杆菌的菌液5?20份。2.根据权利要求1所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物7?20份、苦参提取物7?20份、蛇床子提取物7?20份、食用菌棒提取物7?20份、吸水链霉菌的菌液5?15份、灰产色链霉菌的菌液5?15份、禾粟链霉菌的菌液5?15份、哈茨木霉菌的菌液5?15份、绿色木霉菌的菌液5?15份、淡紫拟青霉菌的菌液5?15份、蜡样芽孢杆菌的菌液5?15份、枯草芽孢杆菌的菌液5?15份、地衣芽孢杆菌的菌液5?15份。3.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物10份、苦参提取物10份、蛇床子提取物10份、食用菌棒提取物10份、吸水链霉菌的菌液5份、灰产色链霉菌的菌液5份、禾粟链霉菌的菌液5份、哈茨木霉菌的菌液5份、绿色木霉菌的菌液5份、淡紫拟青霉菌的菌液5份、蜡样芽孢杆菌的菌液10份、枯草芽孢杆菌的菌液1份、地衣芽孢杆菌的菌液1份。4.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物20份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液6份、枯草芽孢杆菌的菌液6份、地衣芽孢杆菌的菌液6份。5.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物7.5份、苦参提取物20份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液5份、枯草芽孢杆菌的菌液5份、地衣芽孢杆菌的菌液5份。6.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物20份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液10份、禾粟链霉菌的菌液1份、哈茨木霉菌的菌液1份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。7.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物20份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液15份、灰产色链霉菌的菌液15份、禾粟链霉菌的菌液15份、哈茨木霉菌的菌液15份、绿色木霉菌的菌液10份、淡紫拟青霉菌的菌液1份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。8.根据权利要求1或2所述的液态复合生物多控杀菌剂,其特征在于,它是由如下重量份配比的原料组成: 烟叶提取物7.5份、苦参提取物7.5份、蛇床子提取物7.5份、食用菌棒提取物7.5份、吸水链霉菌的菌液1份、灰产色链霉菌的菌液1份、禾粟链霉菌的菌液10份、哈茨木霉菌的菌液10份、绿色木霉菌的菌液15份、淡紫拟青霉菌的菌液15份、蜡样芽孢杆菌的菌液7.5份、枯草芽孢杆菌的菌液7.5份、地衣芽孢杆菌的菌液7.5份。9.一种权利要求1?8所述的液态复合生物多控杀菌剂的制备方法,其特征在于如下步骤: A、烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物的制备方法: a、苦参提取物的制备方法: 称取苦参25公斤,加按照重量百分比60%的乙醇,600C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次加按照重量百分比60%的乙醇量分别为300公斤、250公斤及200公斤,合并上述三次提取的滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得苦参提取物; b、烟叶提取物的制备方法: 称取烟叶25公斤,加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液200公斤,60 °C水浴加热3?4小时,过滤,离心,收集滤液;滤渣按照相同方法再提取二次,三次提取每次加按照重量百分比7.5%的氢氧化钠溶液均为200公斤,合并上述三次滤液,真空减压浓缩至25公斤,制得烟叶提取物; c、蛇床子提取物的制备方法: 称取蛇床子粉25公斤,置于提取罐中加水,蛇床子与水重量比为1:30,水浴100 °C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得蛇床子提取物,置于4°C冷库中保存; d、食用菌棒提取物的制备方法: 称取食用菌棒25公斤,置于提取罐中加水,食用菌棒与水重量比为1:15,水浴100°C下连续浸提3次,每次4?6小时,离心分离,合并3次提取液,真空减压浓缩至25公斤,制得食用菌棒提取物,置于4°C冷库中保存; B、各种菌液的制备: 制备所述吸水链霉菌的菌液、灰产色链霉菌的菌液、禾粟链霉菌的菌液发酵方法: a、斜面菌种活化培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,27?28°C条件下在摇床上振荡培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,27?28°C条件下培养4?5天,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用;b、二级摇瓶菌种培养:取高氏一号合成液体培养基,接入一级斜面菌种,于27?28 °C下培养96?120小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养; c、微生物菌液的发酵生产:取高氏一号合成液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于?!17.2?7.4、温度27?28°C,发酵4?5天,即得,可作为生产菌液备用; 制备所述哈茨木霉菌的菌液、绿色木霉菌的菌液、淡紫拟青霉菌的菌液发酵方法: a、斜面菌种活化培养:取PDA液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,25?28°C条件下在摇床上振荡培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,25?28 °C条件下培养3?5天,转速为60?120转/分,待长出粗壮菌丝后,挑取粗壮菌丝在同样的固体平板培养基上划线,挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用; b、二级摇瓶菌种培养:取PDA液体培养基,接入一级斜面菌种,于25?28°C下培养48?72小时,搅拌转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养; c、微生物菌液的发酵生产:取I3DA液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于pH7.0?7.2、温度25?28°C发酵3?5天,即得,作为生产菌液备用; 制备所述蜡样芽孢杆菌的菌液、枯草芽孢杆菌的菌液、地衣芽孢杆菌的菌液发酵方法: a、斜面菌种活化培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一种上述微生物的斜面培养物,30?40°C条件下在摇床上振荡培养20?48小时,转速为60?120转/分,然后转接到相同的培养基中培养,照此方法连续转接3?5次,将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上,30?40°C条件下培养I?2天,转速为60?120转/分,待长出菌落后,挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线,挑选单菌落转接到固体斜面培养基,培养得到驯化菌株,保存备用; b、二级摇瓶菌种培养:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入一级斜面菌种,于30?40°C下培养20?48小时,转速为60?120转/分,得二级摇瓶种子液;根据生产规模,进一步采用种子罐进行种子的放大培养; C、微生物菌液的发酵生产:取牛肉膏蛋白胨液体培养基,接入上述制备的发酵种子液,于?!17.2?8.5、温度30?40°C,发酵I?2天,即得,作为生产菌液备用; C、液态复合生物多控杀菌剂的制备: 按照权利要求1?8所述原料组分的重量份配比,将上述B步骤制备的各种菌液混合,制成复合菌剂,经检验,使含总有效活菌数达2亿个/毫升,每一种有效菌的数量不得少于2000万个/毫升以上,符合国家标准GB-20287-2006,再按照权利要求1?8所述原料组分的重量份配比,将上述步骤A制备的烟叶提取物、苦参提取物、蛇床子提取物、食用菌棒提取物与如上所述的复合菌剂混合均匀,即得。10.一种权利要求1?8所述的液态复合生物多控杀菌剂的用途,其特征在于,它作为复合生物多控杀菌剂应用于水稻、玉米、小麦、果树及蔬菜病害的防治。
【文档编号】A01P3/00GK105831175SQ201610275374
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月29日
【发明人】王禹博
【申请人】鞍山禾瑞生物科技有限公司


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